大多數(shù)中性蛋白酶是含鋅離子的金屬酶，相對分子質量為35000～40000，等電點為pH值8～9。是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶，很易自溶，即使在低溫冰凍干燥，也會造成相對分子質量的明顯減少。
 

　　(一)一般性質
 

　　大多數(shù)微生物中性蛋白酶是金屬酶，一分子酶蛋白中含一原子鋅，分子質量35 000-40 000，等電點pH8～9，是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶，很易自溶，即使在低溫冰凍干燥，也會造成分子質量的明顯減少。
 

　　代表性的中性蛋白酶是耐熱解蛋白芽孢桿菌所產(chǎn)生的熱解素與枯草桿菌的中性蛋白酶，這些酶在pH6～7穩(wěn)定，超出此范圍迅速失活。以酪蛋白為底物時，枯草桿菌蛋白酶最適pH為7～8，熱解素是7～9，曲霉菌的酶是pH 6.5～7.5。
 

　　一般中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性較差，枯草桿菌中性蛋白酶在pH7，60*(2處理15min，失活90%;棲土曲霉3.942中性蛋白酶55℃處理10min，失活80%以上;而放線菌166中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性更差，只在35℃以下穩(wěn)定，45。
 

　　C迅速失活。只有少數(shù)例外，如熱解素在80℃處理1h，尚存酶活50%;有的枯草桿菌中性蛋白酶，在pH7，65℃酶活幾乎無損失。酶的最適溫度，取決于反應時間，在反應時間lo～30rain內，最適溫度是45～50℃。鈣離子可以增加酶的穩(wěn)定性，并減少自溶。
 

　　(二)活性中心
 

　　酶的活性中心的鋅離子，起著酶同底物之間的橋梁作用。
 

　　有些酶的分子中尚含若干原子鈣(表5—16)。鈣具有穩(wěn)定構象的作用，還同酶的耐拭杜右擎若活性中心的鋅用EDTA去除后，用其他金屬置換，由不同金屬可得到活性不同的酶。
 

　　借助此法可改進蛋白酶的活性以制備高活性蛋白酶結晶，據(jù)認為高活性型的酶其活性中心含有鈣、鈷、銅、錳、鎳和鋅原子，如用鋇、鎘、鐵、鈉、鉛置換，則得到的蛋白酶無活性，結晶的鈣型酶，酶活性比普通的結晶高3倍以上。
 

　　以錳代替多黏芽孢桿菌中性蛋白酶活性中心的鋅，酶活提高56%，并提高了耐熱性。不少中性蛋白酶的氨基酸組成已經(jīng)測定。
 

　　芽孢桿菌中性蛋白酶中，均不含半胱氨酸所構成的二硫鍵，有的還不含甲硫氨酸。對于氨基酸的順序尚不清楚?？莶輻U菌中性蛋白酶，酶分子中的2～3個酪氨酸和1個組氨酸殘基同鋅原子一起是表現(xiàn)酶的活性所不可少的，而一個色氨酸和幾個鈣原子在維持酶的構象上有重要作用。
 

　　短小芽孢桿菌中性蛋白酶，酶活性的表現(xiàn)除需要鋅外，尚需絲氨酸殘基。耐熱性的中性蛋白酶熱解素與枯草桿菌中性蛋白酶A，其活性中心氨基酸是一致的。
 

　　(三)專一性
 

　　中性蛋白酶的最小合成底物是Z—Gty—X—NH：，其中的X須是疏水性大分子氨基酸，若切開點肽鍵的羧基是由丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或組氨酸殘基所提供，則水解力增強。中性蛋白酶對于堿性蛋白酶的合成底物幾乎*沒有作用。
 

　　不少芽孢桿菌也生產(chǎn)堿性蛋白酶?？衫昧u基磷灰石吸附中性蛋白酶，而同堿性蛋白酶分開。由于中性蛋白酶優(yōu)先切開亮氨酸或苯丙氨酸構成的肽鍵，因此可以用呋喃基丙烯酰甘氨基乙酰亮氨酸酰胺(FAGLA，F(xiàn)uryl acryloyl glycyl leucine amide)為底物，用分光光度法作精確的測定。